ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК СО СПЕРМАТОЗОИДАМИ ЧЕЛОВЕКА
Однако - коммерческий успех клеточной терапии приводит к необоснованно широкому пpaктическому применению стволовых клеток без глубокого научного анализа и, соответственно, последующего прогноза их действия на организм.
Очевидно, что обязательным компонентом механизма действия стволовых клеток является их взаимодействие с клетками реципиента, осуществляемое на уровне продукции сигнальных молекул.
Cпepматозоиды человека представляют собой наиболее доступные и эффективные клеточные сообщества для исследования триггерных воздействий информационных биомолекул.
Цель нашей работы - доказательство существования опосредованного через гумopaльные факторы воздействия стволовых клеток на метаболические процессы и, в частности, на активность акрозина cпepматозоидов человека.
Сериновая протеиназа EC 3.4.21.10 - акрозин, является одним из ключевых акросомальных ферментов и играет важную роль в процессе оплодотворения яйцеклетки [Николаев А. А. и др., 2002; Engel W. et al, 2000].
Было проведено исследование функционального состояния акрозиновой системы в контроле (эякуляты фертильных мужчин, n = 11) и опыте (эякуляты фертильных мужчин, n = 15).
Перед проведением исследования cпepматозоиды выделяли после полного разжижения эякулята, путем центрифугирования в градиенте перколла. Все растворы перколла готовили на буфере «HBS+BSA» с рН 8,0 (0,13 М NaCl, 0,004 М KCl, 0,001 М CaCl2, 0,0005 М MgCl2, 0,014 М фруктозы, 0,01 М N-2-гидроксиэтилпиперазин-N¢-2-этансульфоновой кислоты и 1,0 мг/мл бычьего сывороточного альбумина).
В опытной группе отмытые cпepматозоиды инкубировали в течение 30 минут при 37°C в присутствие культуральной жидкости, полученной после отделения выращенных стволовых клеток.
В контрольной группе отмытые cпepматозоиды инкубировали в аналогичных условиях, но в присутствии интактной жидкости, имеющей общие физико-химические хаpaктеристики сопоставимые с культуральной жидкостью.
Определение активности акрозина (EC 3.4.21.10) проводили по методу W. B. Schill [Schill W. B., 1986].
После инкубации cпepматозоиды и контрольной и опытной групп экстрагировали 0,2 М ацетатным буфером с рН 2,4, для диссоциации комплекса акрозина с ингибитором.
Активность свободного акрозина определяли по расщеплению синтетического субстрата - ВАЕЕ.
Общую активность акрозина определяли после быстрого оттаивания (при температуре 23°С в течение 30 минут) cпepмы, предварительно замороженной до -196°С (в жидком азоте).
Проферментную активность рассчитывали по формуле: «ПАА = ОАА - АСА», где ПАА - проферментная активность акрозина, ОАА - общая активность акрозина, АСА - активность свободного акрозина.
Активность акрозина выражали в международных единицах на один миллион cпepматозоидов (мкМЕ/106 сп.).
В контрольной группе активность свободного акрозина составила 1,31±0,05 мкМЕ/106 сп., общая активность акрозина - 5,14±0,12 мкМЕ/106 сп., соответственно, проферментная активность акрозина была равна в среднем 3,83±0,11 мкМЕ/106 сп. Коэффициент «проакрозин/свободный акрозин» (ПА/СА) составил 3,0.
В опытной группе были выявлены фактически два варианта ответов.
При первом более распространенном варианте (n = 12 (80 %)), который мы назвали типичным, активность свободного акрозина увеличивалась в среднем до 2,12±0,06 мкМЕ/106 сп., общая активность акрозина пpaктически не изменялась 5,16±0,15 мкМЕ/106 сп., соответственно, проферментная активность акрозина снижалась в среднем до 3,04±0,15 мкМЕ/106 сп. Коэффициент «проакрозин/свободный акрозин» (ПА/СА) снижался до 1,43.
При втором «парадоксальном» варианте ответа (n = 3 (20 %)), активность свободного акрозина снижалась до 0,93±0,05 мкМЕ/106 сп., общая активность акрозина снижалась достаточно резко - в среднем до 2,43±0,13 мкМЕ/106 сп., соответственно, проферментная активность в среднем составляла 1,50±0,09 мкМЕ/106 сп. При этом коэффициент «проакрозин/свободный акрозин» (ПА/СА) так же снижался в среднем до 1,61.
Таким образом, под влиянием культуральной жидкости, в которой выращивались стволовые клетки отмечается изменение активности одного из важнейших факторов пенетрации - акрозина. Эти изменения в основном направлены на активацию этого фермента находящегося в cпepматозоидах в ингибированном состоянии. Очевидно, что эти эффекты вызваны продуктами жизнедеятельности стволовых клеток и следовательно , некоторые фрагменты биоинформационного перепрограммирования могут осуществляться без непосредственного межклеточного контакта.
Работа представлена на III научную конференцию с международным участием: «Медицинские, социальные и экономические проблемы сохранения здоровья населения, г. Анталия (Турция), 22-29 мая 2005 г.», поступила в редакцию 28.04.2005 г.
26 04 2024 2:22:31
Статья в формате PDF 106 KB...
25 04 2024 0:53:17
Статья в формате PDF 166 KB...
24 04 2024 5:58:26
23 04 2024 3:17:26
Статья в формате PDF 122 KB...
22 04 2024 11:12:18
Статья в формате PDF 101 KB...
21 04 2024 18:24:23
Статья в формате PDF 109 KB...
20 04 2024 16:41:16
Статья в формате PDF 124 KB...
19 04 2024 4:16:33
Статья в формате PDF 111 KB...
18 04 2024 9:45:18
Статья в формате PDF 161 KB...
17 04 2024 16:43:49
Статья в формате PDF 209 KB...
15 04 2024 17:22:48
Статья в формате PDF 267 KB...
14 04 2024 11:23:45
В статье рассмотрены реакции 1,3-дегидроадамантана, относящегося к напряженным мостиковым [3.3.1]пропелланам, с диметилтрисульфидом. Установлено, что при взаимодействии образуются 1,3-бис(метилтио)адамантан, 1-(метилдитио)-3-(метилтио)адамантан и 1,3-бис(метилдитио)адамантан в соотношении 1:4,5:1. Структуры полученных соединений подтверждены методами хромато-масс-спектометрии и ЯМР1Н-спектроскопии. Выход целевого 1-(метилдитио)-3-(метилтио)адамантана составляет 50 %. Было предположено, что реакция протекает по радикальному механизму. Приведено описание эксперимента. ...
13 04 2024 2:30:37
Статья в формате PDF 250 KB...
12 04 2024 8:27:33
Статья в формате PDF 106 KB...
10 04 2024 23:52:31
Статья в формате PDF 126 KB...
09 04 2024 1:28:57
Статья в формате PDF 138 KB...
08 04 2024 12:23:47
Статья в формате PDF 133 KB...
07 04 2024 13:40:20
Статья в формате PDF 113 KB...
06 04 2024 17:12:49
Статья в формате PDF 102 KB...
05 04 2024 18:21:54
Статья в формате PDF 579 KB...
04 04 2024 14:24:38
Статья в формате PDF 124 KB...
03 04 2024 3:12:24
Статья в формате PDF 253 KB...
02 04 2024 20:29:41
01 04 2024 0:25:40
Статья в формате PDF 581 KB...
31 03 2024 10:49:36
Статья в формате PDF 119 KB...
29 03 2024 21:54:48
26 03 2024 22:58:13
Статья в формате PDF 105 KB...
25 03 2024 2:50:33
В настоящей работе представлены авторские иммуно - цитологические методики исследования назально - ассоциированной лимфоидной ткани (НАЛТ), позволяющие судить о состоянии местной клеточной защиты (МКЗ). В объем исследований были включены способы цитологического анализа НАЛТ, определения эпителиально - лимфоцитарного соотношения, идентификации популяций лимфоцитов, оценки степени генерации лимфоцитов, репродукции клеток, взаимодействия эпителиальных М- клеток и лимфоцитов, макрофагов и лимфоцитов в цитограммах НАЛТ. Описанные методики имеют ряд преимуществ перед существующими аналогами и могут быть эффективно использованы в клинической и лабораторной пpaктике. ...
24 03 2024 20:36:47
Статья в формате PDF 113 KB...
23 03 2024 15:25:42
Статья в формате PDF 104 KB...
22 03 2024 8:52:11
Статья в формате PDF 191 KB...
21 03 2024 0:40:32
Статья в формате PDF 420 KB...
20 03 2024 21:11:39
Статья в формате PDF 129 KB...
19 03 2024 21:37:52
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::