СКЛОННОСТЬ МАКРОФАГОВ К Н2О2-ИНДУЦИРОВАННОМУ АПОПТОЗУ КАК ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРОЦЕССА
В реализации защитной программы воспаления макрофагам отводится важнейшая роль. Макрофаги не только участвуют в регуляции воспалительной реакции, но и активируют иммунную систему [Wang et al., 1996]. В этой связи, очевидно, что понижение реактивности макрофагов будет выступать одним из факторов, лимитирующих эффективность воспалительного ответа организма. Ограничение функциональных возможностей макрофагов в зоне повреждения приводит к незавершенности фагоцитоза и хронизации воспалительного процесса. Агрессивность среды очага воспаления меняется на разных стадиях патологического процесса, достигая своего максимума уже в стадию альтерации. Повреждение молекул липидов, белков, ДНК, определяет степень и глубину угнетения клеточных процессов и, в конечном итоге, гибель клеток по тому или иному альтернативному пути (апоптоз или некроз). Таким образом, рассматриваемая проблема может быть охаpaктеризована в рамках реализации генотоксического действия медиаторов воспаления и продуктов распада биомолекул, включая свободные радикалы.
В настоящей работе представлены данные о влиянии перекиси водорода (Н2О2) на апоптоз перитонеальных макрофагов крыс линии Вистар (масса тела 250-280 г) при экспериментальном остром перитоните. Макрофаги получали путем промывания брюшной полости животных средой PRMI 1640 с добавлением 20%-ной телячьей сыворотки, 3%-ного раствора глутамина, пенициллина (100 ед/мл) и стрептомицина (100 мг/мл) в стерильных условиях. Перитонеальную жидкость на холоду отмывали в среде PRMI 1640. В конечном разведении концентрация клеток составляла 3 млн./мл Жизнеспособность макрофагов определяли в тесте с трипановым синим. Монослои перитонеальных макрофагов формировали на предметных стеклах и культивировали в чашках Петри в среде PRMI 1640 при 37°С в течение 3 часов. Апоптоз культивируемых макрофагов вызывали добавлением перекиси водорода в концентрациях 1 ммоль и 10 ммоль. Апоптотически измененные клетки выявляли методами флуоресцентной и световой микроскопии, используя акридиновый оранжевый, Hoechst 33258 (Sigma), краситель Гимза (Merk). Кроме морфологических критериев, для оценки апоптоза использовали флуориметрическое определение с помощью Hoechst 33258 при длинах волн возбуждения 355 нм и эмиссии 450 нм продуктов межнуклеосомной деградации ДНК [Mosser et al., 1992].
Обнаружено, что перитонеальные макрофаги, изолированные из брюшной полости крыс, спустя 10-12 часов после моделирования перитонита хаpaктеризуются высокой жизнеспособностью (до 98 %). В последующей динамике воспалительного процесса количество живых клеток, выделенных из брюшной полости крыс, уменьшалось.
Перекись водорода стимулировала гибель макрофагов, выделенных из очага воспаления и культивируемых в виде монослоев, как по пути апоптоза, так и некроза. Признаки апоптоза макрофагов проявлялись через 1 час после добавления Н2О2. У акридинового оранжевого максимум флуоресценции смещался в длинноволновую область спектра (замена зеленой флуоресценции на желто-зеленую). Неравномерность свечения в разных частях ядра свидетельствовала о конденсации хроматина. Форма ядра изменялась от округлой до неправильной. Апоптотические клетки, накапливающие Hoechst 33258, имели ярко-зеленое свечение хроматина, конденсированного по периферии, либо представлялись полностью фрагментированными на 3-5 частей. Живые клетки выводили Hoechst 33258 и имели тускло-зеленую флуоресценцию. Световая микроскопия показала наличие клеток меньшего размера, сморщенных и содержащих несколько фрагментов ядра, а также явление блеббинга, связанного с нарушением цитоскелета клетки.
Под влиянием перекиси водорода в концентрации 1 ммоль в монослоях макрофагов доля апоптотирующих клеток возрастала в среднем до 24 %. Некроз в популяции анализируемых клеток отмечался в редких случаях. Перекись водорода в концентрации 10 ммоль способствовала увеличению количества апоптотирующих макрофагов до 30 %, а некротически измененных клеток до 12 %.
В экссудате, полученном от крыс с острым перитонитом, развивающимся более 12 часов и хаpaктеризующимся высоким процентом гибели животных, под влиянием перекиси водорода наблюдалось увеличение доли некротических клеток и уменьшение числа макрофагов, гибнущих путем апоптоза.
Очевидно, что снижение функциональной активности макрофагов в зоне повреждения приводит к незавершенности воспалительного процесса. В связи с этим, выявление в экссудате макрофагов, склонных к апоптозу или к некрозу, может использоваться как диагностический критерий прогноза воспалительного процесса в брюшной полости. Апоптоз является оптимальным вариантом выбpaковки поврежденных клеток и способствует в отличие от некроза оптимизации воспалительного процесса. В свою очередь, перекись водорода выступает эффективным индуктором апоптоза, позволяющим выявить и элиминировать популяцию клеток с ослабленным антиоксидантным потенциалом и предрасположенных к генетическим повреждениям относительно безболезненно для организма.
- Mosser D. D., Martin L. H. J. /Cell. Physiol.1992.V.151.P.561-570.
- Wang Y., Mathews W. R., Guido D. M., Jaeschke H. Pharmac /Exp. Therap.1996. №2. P. 714-720.
Статья в формате PDF
112 KB...
26 04 2024 10:56:44
Статья в формате PDF
103 KB...
25 04 2024 20:40:47
Статья в формате PDF
126 KB...
24 04 2024 4:51:29
Статья в формате PDF
174 KB...
23 04 2024 16:10:49
Статья в формате PDF
500 KB...
22 04 2024 14:11:21
Предпочитающие алкоголь крысы при исследовании поведения в тестах «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт» показали значимо большую двигательную активность и признаки повышенной тревожности. Содержание дофамина и норадреналина в миндалевидном комплексе мозга предпочитающих алкоголь крыс значимо выше, у них также ускорен метаболизм дофамина по сравнению с не предпочитающими алкоголь крысами.
...
21 04 2024 6:59:26
Статья в формате PDF
143 KB...
20 04 2024 1:16:37
Статья в формате PDF
113 KB...
19 04 2024 3:21:33
Статья в формате PDF
111 KB...
15 04 2024 10:47:39
В северо-восточных предгорьях Алтая на междуречье Бии и Катуни скважиной вскрыты плиоценовые озерные отложения. Литологические, минералогические, геохимические особенности этих отложений и ископаемая фауна моллюсков указывают на значительное похолодание и увлажнение климата по сравнению с теплым и аридным позднемиоценовым временем. По температурным условиям климат плиоцена мог быть близким современному климату в этом районе, но с годовым количеством осадков в два раза ниже.
...
14 04 2024 16:37:49
Статья в формате PDF
312 KB...
13 04 2024 21:11:28
Статья в формате PDF
86 KB...
12 04 2024 11:43:59
Статья в формате PDF
99 KB...
11 04 2024 20:14:43
Статья в формате PDF
100 KB...
10 04 2024 20:13:30
В статье авторы показали изменение плоидности и площади ядер слизистой оболочки желудка при фоновых, предpaковых заболеваниях и paке желудка различного гистологического строения с помощью компьютерного анализатора изображения. При дисплазии тяжелой степени площадь и плоидность ядра составили 213,7±3,42 мкм² и 10,2±0,2с соответственно. При высокодифференцированной аденокарциноме эти показатели достигают 375,0±17,0 мкм² и 16,2±2,7с. Авторы предположили, что полученные данные могут быть использованы для более объективной оценки патологических процессов в слизистой желудка и дифференциальнодиагностических вопросов между дисплазиями и paком желудка.
...
09 04 2024 7:12:51
Статья в формате PDF
98 KB...
08 04 2024 10:46:11
Статья в формате PDF
108 KB...
07 04 2024 9:22:35
Статья в формате PDF
96 KB...
06 04 2024 3:42:13
Статья в формате PDF
110 KB...
05 04 2024 19:16:13
Статья в формате PDF
101 KB...
04 04 2024 7:58:51
Статья в формате PDF
119 KB...
03 04 2024 18:24:27
Статья в формате PDF
181 KB...
02 04 2024 21:59:50
Статья в формате PDF
111 KB...
01 04 2024 17:55:26
Статья в формате PDF
90 KB...
31 03 2024 22:16:10
Статья в формате PDF
106 KB...
30 03 2024 0:48:36
Статья в формате PDF
126 KB...
29 03 2024 9:12:59
Статья в формате PDF
172 KB...
28 03 2024 22:17:32
Статья в формате PDF
125 KB...
27 03 2024 5:51:33
Статья в формате PDF
110 KB...
26 03 2024 12:22:37
Статья в формате PDF
339 KB...
24 03 2024 14:56:34
В работе изучены социально-гигиенические условия труда и быта военнослужащих региона Средней Волги, оценена информативность и значимость каждого из них в развитии ишемической болезни сердца.
...
23 03 2024 22:30:48
Статья в формате PDF
123 KB...
22 03 2024 16:32:42
Статья в формате PDF
130 KB...
21 03 2024 7:38:29
Статья в формате PDF
137 KB...
19 03 2024 21:26:20
Статья в формате PDF
154 KB...
18 03 2024 10:53:11
Еще:
Поддержать себя -1 :: Поддержать себя -2 :: Поддержать себя -3 :: Поддержать себя -4 :: Поддержать себя -5 :: Поддержать себя -6 :: Поддержать себя -7 :: Поддержать себя -8 :: Поддержать себя -9 :: Поддержать себя -10 :: Поддержать себя -11 :: Поддержать себя -12 :: Поддержать себя -13 :: Поддержать себя -14 :: Поддержать себя -15 :: Поддержать себя -16 :: Поддержать себя -17 :: Поддержать себя -18 :: Поддержать себя -19 :: Поддержать себя -20 :: Поддержать себя -21 :: Поддержать себя -22 :: Поддержать себя -23 :: Поддержать себя -24 :: Поддержать себя -25 :: Поддержать себя -26 :: Поддержать себя -27 :: Поддержать себя -28 :: Поддержать себя -29 :: Поддержать себя -30 :: Поддержать себя -31 :: Поддержать себя -32 :: Поддержать себя -33 :: Поддержать себя -34 :: Поддержать себя -35 :: Поддержать себя -36 :: Поддержать себя -37 :: Поддержать себя -38 ::
